一、项目概述

本研究用分枝结核杆菌的Ag85B、MPT-83和ESAT-6基因制备成核酸疫苗，进行了实验动物（小鼠）和本动物（牛）的免疫试验和保护效率分析，与传统的卡介苗相比，我们所提供的多价核酸疫苗与佐剂DDA联合使用后对结核分枝杆菌具有更大的杀伤力，显著增强了对小鼠和牛的保护作用，具有良好的结核病预防效果，证明我们已经开发出比现有BCG疫苗具有更高保护效率并具有生物安全性的结核病预防性疫苗。

现正式寻求技术转让或联合开发。

二、应用范围

可用于大家畜（主要是牛和羊）的结核病保护。由于该病是人畜共患（主要通过牛奶、羊奶传播），所以，改进后的疫苗很可能同时用于抗人的结核病。

三、技术优势

本发明所提供的结核杆菌核酸疫苗为Ag85B、MPT-83和ESAT-6基因分别克隆到真核表达载体pJW4303后联合而成的多价核酸疫苗，与佐剂DDA联合使用。其主要特征在于：Ag85B、MPT-83和ESAT-6三个基因与其他核酸序列融合或缺失部分序列或部分核苷酸突变后的核苷酸序列，与带有巨细胞病毒（CMV）早期基因启动子的真核表达载体pJW4303相融合。接种小鼠或牛以后能产生强大的免疫效果，使免疫动物得到充分的保护。

由于BCG疫苗无法用于牛的免疫，其原因是牛接种了BCG疫苗后，会影响到牛结核病常规检疫方法皮内变态反应的使用，PPD检疫为阳性的牛时，无法区分是疫苗产生的效果，还是牛患有结核病。因此，本项目在世界上首次为大动物牛提供了结核病免疫保护的疫苗。

本发明不仅增强了免疫动物的肌体体液应答反应，同时增强了细胞介导的免疫反应，而后者是提高DNA疫苗效率的重要前提条件。与活的BCG疫苗和亚单位疫苗相比较, 本发明中的核酸疫苗还具有其他潜在优点：容易生产，稳定性强，较安全，不引起结核菌素的敏感反应。此外，核酸疫苗可免疫HIV免疫缺陷的病人，而BCG疫苗却不能用于这种病人。而且免疫小鼠的肺部载菌量来看，本发明的多价核酸疫苗的保护效率要高于卡介苗，表明本发明可以取代传统的卡介苗用于结核病的预防。本项研究与国内外研究的不同之处在于该组多价疫苗免疫小鼠后，由于使用了含信号肽的真核高效表达载体，确保了抗原高效持续表达并分泌到胞外。本发明所用的佐剂DDA大大提高了疫苗的保护效率。由本发明对小鼠的免疫效果可推断，本发明中的核酸疫苗显著提高了对动物的保护效率，对大型动物（如牛、羊等）的保护效率也必定高于以前报导的核酸疫苗保护效率。如果用该核酸疫苗免疫牛，必将大大减少牛患结核的机率，保证牛肉及牛奶的产量和质量。如果用该核酸疫苗免疫人，不但能让人体产生对结核杆菌的免疫力，而且不会发生结核菌素的敏感反应，增强了疫苗的安全性。

四、技术水平

本项目所提供的主要用于保护牛的结核病多价核酸疫苗是世界首次。目前正在申请包括中国和世界上其他主要畜牧生产大国，如美国、英国、法国及澳洲的发明专利。

五、项目所处阶段

本项目受国家863重大专项资助，2003年正在我国新疆进行中试。

六、市场状况及市场预测

结核病是一种人、畜共患的慢性消耗性传染病。随着爱滋病人数的增加、抗药性菌株的产生等，结核病的发病率有逐年增加的趋势。据国外有关资料报导，目前世界上有约10～20亿人口感染有结核杆菌,每年有大约3百万人死于结核病,同时又有1000万新病例出现。据资料反映,我国目前有上亿人感染有结核分枝杆菌，结核病患者约600万人，每年因治疗不及时造成死亡的人数约25.6万余人。如果不尽快改进结核病的控制措施，将有2亿多人发展成活动性肺结核。牛结核是家畜的一种慢性传染病且能传染给人。人、畜结核病的交叉传播是造成结核病广泛流行的重要原因。如果奶牛患有结核病,不但影响泌乳量和乳的营养成份,而且可通过各种途径传染给人。

本发明所提供的多价结核杆菌核酸疫苗是由结核分枝杆菌的Ag85B、MPT-83和ESAT-6分泌蛋白抗原的基因定向克隆到动物表达载体pJW4303中构建组合而成的多价结核杆菌DNA疫苗。应用该疫苗分别免疫小鼠和牛都获得了很好的免疫保护效果，对提高动物及人类对结核杆菌的免疫力，更有效地控制结核病的传播和流行，繁荣畜牧业及增强人类体质具有重要的理论意义和应用价值，有着广阔的市场前景。

七、所需设备及投资估算

微生物发酵装置，核酸疫苗（至少常规疫苗）生产设施，总投资约为500万元左右。

八、受让方接产条件

有操作DNA能力，有兽用或人用疫苗生产的基本设施与推广渠道。

九、效益分析

　　结核病是一种慢性的消耗性传染病，人畜结核病的交叉传染是造成结核病不断传染的重要原因。据有关资料报道，世界上人结核的患者中，约有15％是饮用了患牛结核病的奶而得病。牛结核病严重影响了动物的健康，并对牧场造成惨重的经济损失，世界范围内有5000万头牛感染了结核，造成了经济损失每年达30亿美元。目前我国每年养牛的存栏数达到1亿3千万头，我国一些省区牛结核病的发病率呈现上升趋势，已达到9％的阳性率。如果阳性率按2％计算，每头牛按2000元计算，造成的直接经济损失可达50亿元人民币以上。因此，搞好牛结核病的防治工作最重要的是要研制成功合理有效的结核杆菌疫苗，用于结核病的预防与治疗。我们所采用的这项技术是把高新科技成果转化为生产力的一个新开端，通过分子生物学方法对牛结核病进行控制，在当前奶牛业、肉牛业大发展的今天，将会起到事半功倍的效果，为及早的控制和消灭结核病，提高畜产品的品质和经济价值、提高并增强产品的市场竞争力，提高全人类的健康发挥重要作用。由于该技术的先进性、实用性、有效性和易于推广性，市场前景不可估量。